Western Blot檢測（蛋白印跡雜交）

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離的蛋白質(zhì)樣品，通過轉(zhuǎn)膜方式轉(zhuǎn)移到固相載體(如PVDF、NC膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記(通常是HRP)的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物化學(xué)發(fā)光試劑(如ECL)發(fā)光以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。

ELISA( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )，酶聯(lián)免疫吸附測定

ELISA 是一種結(jié)合抗原、抗體特異性反應(yīng)和酶對(duì)底物高效催化作用的高敏感性免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，洗滌使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，通過反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶含量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。