逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR（RT-qPCR)

定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)，也稱實(shí)時(shí)PCR(Real-time PCR)或者實(shí)時(shí)定量PCR，是指借助熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，在PCR指數(shù)擴(kuò)增期間實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)體系中的熒光信號(hào)強(qiáng)度的變化，從而對(duì)目的基因進(jìn)行定量分析的PCR檢測(cè)技術(shù)。

基因表達(dá)的研究一般采用相對(duì)定量的方法。相對(duì)定量法必須對(duì)樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后 得出對(duì)于內(nèi)參基因的目的基因的相對(duì)量。通過比較樣品中目的基因反轉(zhuǎn)錄之后的 DNA 量來(lái)研究不同樣品間的 mRNA 表達(dá)量情況。內(nèi)參基因通常選用 β-actin 或 GAPDH。通過同時(shí)對(duì)內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)檢測(cè)，可以對(duì)樣品之間由于起始細(xì) 胞數(shù)不同或 RNA 提取效率不同等造成的 RNA 量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對(duì)樣品之間的 mRNA 表達(dá)量進(jìn)行分析的目的。

雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)

雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)采用熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶組成雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)中，報(bào)告基因（熒火蟲熒光素酶）活力的改變，與基因表達(dá)的特定實(shí)驗(yàn)條件相關(guān)；而示蹤基因（海腎熒光素酶）作為內(nèi)對(duì)照，使測(cè)試不被實(shí)驗(yàn)條件變化所干擾，減少內(nèi)在的變化因素所削弱的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，如，培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目和活力的差別，細(xì)胞轉(zhuǎn)染和裂解的效率等。熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶測(cè)試的組合，提供了雙遺傳報(bào)告基因應(yīng)用的理想測(cè)試系統(tǒng)。

使用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)miRNA與預(yù)測(cè)靶點(diǎn)的相互作用或轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的相互作用。